雞禽流感病毒抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）使用說明書

【產(chǎn)品名稱】
通用名：雞禽流感病毒IgG抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
英文名：Diagnostic Kit for Chicken Antibodies to Avian Influenza Virus (ELISA)
【包裝規(guī)格】 96T×1/盒、96T×2/盒
雞禽流感病毒抗體檢測試劑盒【預期用途】 禽流感又名真性雞瘟或歐洲雞瘟，是由A型禽流感病毒（Avian Influenza Virus，AIV）引起的禽類的一種急性、高度致死性傳染病，以急性敗血性死亡到無癥狀帶毒為特征。
本試劑用于檢測禽類血清中禽流感病毒抗體，可用于免疫效果評價、輔助診斷等。
【原    理】
    本試劑盒系由預包被禽流感病毒抗原的酶標板、酶標記物及其他配套試劑組成，應(yīng)用酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測雞血清或血漿中禽流感病毒抗體。實驗時，在酶標板中加入對照血清和稀釋的待檢血清，經(jīng)溫育后，若樣品中含有禽流感病毒的抗體，則將與酶標板上抗原結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后；再加入酶標記物，與酶標板上抗原抗體復合物發(fā)生特異性結(jié)合；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶結(jié)合物，在孔中加TMB底物液，與酶反應(yīng)形成藍色產(chǎn)物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān)；加入終止液終止反應(yīng)后，產(chǎn)物變?yōu)?；用酶標儀在450nm波長測定各反應(yīng)孔中的吸光值，即可知樣品是否含有禽流感病毒抗體。
【試劑盒組成】 

【儲存及有效期】 于2～8℃避光保存，有效期為12個月。
包被板開封后請于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為2個月。
【適用儀器】 含450nm、630nm波長的酶標儀，37℃恒溫設(shè)備，可調(diào)微量移液器。
【樣品準備】
1.取動物全血按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無溶血、無污染。樣品1周內(nèi)可于2～8℃保存，長期需置-20℃保存。
2.用樣品稀釋液將待檢血清按100倍稀釋（如2μl血清加入198μl樣品稀釋液中，混勻）。陰、陽性對照不用稀釋。
3.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋。
【檢驗方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復至室溫。
2.取所需用量酶標板條，設(shè)空白對照1孔、陰性/陽性對照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。
3.空白對照孔加樣品稀釋液100μl；陰、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照100μl；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。
4.混勻，置37℃反應(yīng)30分鐘。
5.扣去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，重復洗滌5次，拍干。
6.每孔加酶標記物100μl（空白孔除外）。置37℃反應(yīng)30分鐘。
7.洗滌，同步驟5。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混勻，37℃避光反應(yīng)10分鐘。
9.每孔加終止液50μl，混勻，用空白孔調(diào)零，于450nm(可用630nm作參比波長）測定各孔吸光值（A值）。
【參考值】 實驗正常的情況下，陰性對照≤0.20，陽性對照≥0.6。
【檢驗結(jié)果的解釋】
1.C.O（臨界值）=0.13+陰性對照孔均值（陰性對照孔均值低于0.07時以0.07計算）；
2.未曾免疫雞群：樣品A值≥C.O為陽性；樣品A值＜C.O為陰性。
3.免疫雞群：監(jiān)測并記錄樣本當時的抗體水平，根據(jù)結(jié)果分析抗體水平的分布及雞群免疫狀態(tài)的動向。
【試驗方法的局限性】
    該試驗僅作為定性檢測雞血清或血漿中禽流感病毒IgG抗體，根據(jù)A值高低可作抗體水平強、中、弱的粗略評估。
【注意事項】
1.實驗操作時需戴手套、穿工作衣，嚴格健全和執(zhí)行消毒隔離制度，各種實驗廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
2.終止液具有腐蝕性，應(yīng)避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗。
3.酶標板從冷藏環(huán)境中取出時應(yīng)恢復至室溫方可開袋，未用完的酶標板需放入有干燥劑的密封袋中保存。
4.濃縮洗滌液在低溫時容易結(jié)晶，使用時需恢復至室溫以*溶解。
5.洗滌時各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。
6.用于檢測的樣品應(yīng)保持新鮮。
7.試驗結(jié)果的判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。
8.不同批號試劑組分不得混用。